Trabajo Practico Laboratorio 3er año

Trabajo Práctico: “Extracción de ADN de banana” Introducción El ADN (ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO) es una molécula que tiene la capacidad de guardar la información genética de los seres vivos. Si secuenciamos el ADN de una bacteria, el de un dinosaurio, el de una vaca o un humano, veremos que todos están “escritos” en el mismo idioma, utilizando secuencias ordenadas de los distintos nucleótidos A (adenina), T (timina), G (guanina), y C (citosina). La diferencia es que algunos genomas son más grandes y complejos, mientras que otros son más sencillos. Dado que esta INCREÍBLEMENTE INTERESANTE molécula lleva en sí la información de cada uno de nuestros genes, se la suele comparar con un libro de recetas que tiene órdenes que serán seguidas al pie de la letra por el organismo para que todo funcione correctamente. Es por eso que si alguna de estas órdenes está “mal escrita”, se evidenciarán fallas. Un ejemplo de esto son las enfermedades genéticas. Cada gen tiene una orden, un gen mutado puede no ser interpretado por la maquinaria celular como corresponde y en consecuencia, envía una orden incorrecta, provocando los problemas que se manifiestan en la persona enferma. Por esta razón, a los científicos les es muy útil poder extraer el ADN de diferentes especies, dado que les permite estudiar sus genes y ver si presentan fallas o no, entre otras cosas. Con esa información pueden plantear curas para enfermedades, o idear estrategias para obtener vacas con mayor productividad, tomates más ricos, desarrollar vacunas, etc. En este marco, en el día de hoy, les proponemos ponerse en la piel de un científico y llevar a cabo la extracción del ADN de banana. El procedimiento requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tiene que romperse la pared celular (sólo presente en vegetales) y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último, separar los restos celulares para quedarnos sólo con la molécula que nos interesa. Objetivos Extraer ADN de banana. Aprender conceptos relacionados con la biología molecular, ingeniería genética y las aplicaciones biotecnológicas que podría tener el ADN extraído. Materiales ✓ Media banana ✓ Detergente (1 cdita.) ✓ Sal de mesa (1 cda) ✓ Papel filtro (1) ✓ Agua ✓ Alcohol frío (5/6 cditas) ✓ Placa de vidrio (1) ✓ Vaso de precipitado de 250ml (1) ✓ Embudo mediano (1) ✓ Erlenmeyer (1) ✓ Tenedor de metal (1) ✓ Cuchara de metal (1) ✓ Papel tisú ✓ Pipeta Pasteur (1) Procedimiento y fundamentos de los mismos 1) Cortar la banana en rodajas, colocarla en la placa de Petri y pisarla bien con ayuda del tenedor, aplastándola contra el recipiente para romper la pared celular. Pasar el contenido al vaso de precipitado. 2) Agregar 1 cdita. de detergente. Mezclar, tratar de no formar espuma. Este paso nos va a permitir disolver las grasas de la membrana plasmática y nuclear llevándolas a la ruptura. Presionar contra las paredes para hacer más eficiente la ruptura. 3) Agregar 1 cdita. bien colmada de sal de mesa. Mezclar. La sal de mesa es cloruro de sodio (NaCl), debido al alto contenido en sodio (catión = carga positiva) atraerá las moléculas de ADN. Recuerden que en el ADN hay fosfatos que tienen cargas negativas; positivo del Na+ y negativo del fosfato se quieren y entonces se atraen! Esto va a impedir que se destruyan las moléculas que queremos aislar. 4) Colocar toda la mezcla sobre el filtro. Agregar cuidadosamente gotas de agua para facilitar la filtración. Mover la mezcla con la cuchara para que filtre mejor, MUCHO CUIDADO DE NO ROMPER EL FILTRO! Así quedan retenidos los restos celulares más grandes y atraviesa el ADN. 5) ESTE PASO VA CON CUIDADO!!!! Agregar LENTAMENTE igual volumen del alcohol que el volumen de filtrado (esta cantidad puede variar). Dejándolo caer por los bordes para que forme una capa sobre el filtrado. El alcohol sirve para cambiar de medio y provocar que el ADN que tanto estamos buscando suba, mientras que el agua y demás restos celulares quedan debajo. 6) Dejar reposar el tiempo necesario hasta que comiencen a diferenciarse dos capas, el DNA sube hacia el alcohol. Observar “La medusa de ADN”. 7) Optativo: Con un palillo/cucharita retirar las hebras de ADN y colocarlas sobre un papel tisú. Reflexionemos un poco 1)¿Cómo fue la experiencia de tu grupo? ¿Lograron extraer el DNA de la banana? ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 2) En caso de no haberlo logrado, ¿se les ocurre cuál pudo haber sido el problema? En caso de haberlo logrado ¿tuvieron alguna dificultad durante el proceso? ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 3) Realiza un esquema del ADN obtenido. ¿Te imaginabas que tenía ese aspecto? ¿cómo lo imaginabas? Describe el aspecto del mismo. ………………………………………………………………………………………………………………………….. ………………………………………………………………………………………………………………………….. 4) ¿Cuál fue la función que cumplió el detergente durante el protocolo de extracción? ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 5) ¿Y la del filtro? Investigá sobre una forma de reemplazarlo, y explicalo. …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6)¿Y la de la sal? ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………... 7) ¿Se podrá seguir el mismo procedimiento para extraer el ADN de una frutilla o una cebolla? ¿por qué? ¿y de una célula de un ratoncito? ¿qué diferencia encuentras? ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 8) ¿Para qué creés que a los científicos les interesa obtener el ADN de las células de plantas o de animales? …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 9) Elegí una de las causas del punto anterior, investigalas y desarrollá cómo usan los científicos el ADN extraído de plantas o animales (según tu elección).